Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DPH2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409607
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DPH2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico DPH2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DPH2 Antibody (6E7): sc-101200
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DPH2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409607 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DPH2 codifica un enzima essenziale della via biosintetica della diftamide, che modifica un’istidina conservata del fattore di allungamento 2 della traduzione eucariotica (EEF2). Questa modifica post-traduzionale supporta la fedeltà della traduzione e influenza le risposte cellulari allo stress che colpisce i ribosomi, collegando l’attività di DPH2 al controllo fondamentale della sintesi proteica. L’alterazione dei componenti della via della diftamide può modificare la proteostasi e la segnalazione dello stress, rendendo DPH2 un nodo utile per studiare i meccanismi di regolazione della traduzione. Poiché la diftamide di EEF2 è anche un determinante della sensibilità a specifiche tossine batteriche, DPH2 rappresenta un punto d’ingresso gestibile per indagare le interazioni ospite–patogeno e la biologia delle tossine nelle cellule umane.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DPH2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DPH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DPH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DPH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DPH2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DPH2 per lo studio della segnalazione di DPH2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DPH2 critici per la funzione di DPH2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DPH2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal DPH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DPH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DPH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal DPH2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DPH2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DPH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DPH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.