Plásmido CRISPR de Activación (h) DOCK 180: sc-401387-ACT

DOCK1 humano (DOCK180) es un factor de intercambio de nucleótidos de guanina atípico que activa GTPasas de la familia Rac para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la adhesión celular y la migración dirigida. A través de nodos de señalización aguas abajo de integrinas, receptores tirosina quinasa y receptores de quimiocinas, DOCK180 sostiene procesos como la formación de lamelipodios, la macropinocitosis y la fagocitosis de células apoptóticas. La señalización de Rac dependiente de DOCK1 se interconecta con vías que regulan las transiciones epitelio-mesenquimales, los programas de motilidad asociados a la invasión y el tráfico de células inmunitarias innatas. La actividad o expresión desregulada de DOCK1 se ha asociado con fenotipos inflamatorios y comportamientos relevantes para la diseminación de células tumorales, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos en biología del cáncer e inmunología.

DOCK 180 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DOCK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DOCK 180 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DOCK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DOCK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DOCK 180. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DOCK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DOCK 180 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DOCK 180 en células tumorales con expresión de DOCK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.