DNase II Plasmide Double Nickase (h): sc-405046-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNase II Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNase II Double Nickase Plasmid (h) e il DNase II Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNASE2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNase II Plasmide Double Nickase (h) | sc-405046-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNase II Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405046-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **DNASE2** codifica la DNasi II, un’endonucleasi acida localizzata principalmente nei lisosomi che catalizza la degradazione del DNA all’interno di fagolisosomi e autolisosomi. Questa attività favorisce l’eliminazione degli acidi nucleici derivati da cellule apoptotiche e del DNA genomico proveniente dal materiale fagocitato, contribuendo a mantenere l’omeostasi degli acidi nucleici durante la fagocitosi e l’autofagia. Limitando la persistenza di DNA intracellulare, la DNasi II modula le vie di sensing dell’immunità innata legate al riconoscimento degli acidi nucleici e alla successiva segnalazione infiammatoria. Una funzione alterata di **DNASE2** è stata associata ad accumulo anomalo di DNA e a fenotipi di attivazione immunitaria, rendendolo rilevante per studi su infiammazione, autoimmunità e biologia dei macrofagi.
DNase II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNASE2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNASE2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNASE2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNASE2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.