Dmp1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402941-ACT

Il gene umano **DMTF1** codifica il fattore di trascrizione **Dmp1**, che si lega alla ciclina D ed è un regolatore della progressione del ciclo cellulare e della differenziazione associato alla soppressione tumorale. Dmp1 integra i segnali mitogenici con il controllo trascrizionale delle vie di checkpoint, in particolare tramite l’attivazione dell’asse **ARF–MDM2–TP53** e la modulazione di programmi dipendenti da **RB/E2F**. Influenzando senescenza, apoptosi e limitazione della proliferazione, DMTF1 contribuisce a mantenere la stabilità genomica in risposta alla segnalazione oncogenica. Alterazioni nell’espressione o nella funzione di DMTF1 sono state collegate a un controllo della crescita deregolato in molteplici contesti rilevanti per il cancro, rendendolo un nodo utile per studiare le risposte allo stress e le decisioni sul destino cellulare.

Dmp1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DMTF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dmp1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DMTF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DMTF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dmp1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DMTF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dmp1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dmp1 nelle cellule tumorali con espressione di DMTF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.