Dlx-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402961-ACT

DLX2 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor Dlx-2, einen nukleären Regulator, der während der embryonalen Entwicklung Genexpressionsprogramme koordiniert, insbesondere bei der Musterbildung des Vorderhirns, der Differenzierung von Interneuronen und der kraniofazialen Morphogenese. Dlx-2 wirkt innerhalb transkriptioneller Netzwerke, die mit Signal- und Linienfestlegungswegen (Lineage-Specification) verflochten sind und das Schicksal, die Migration und die Reifung neuronaler Vorläuferzellen steuern. Eine veränderte DLX2-Expression wurde im Zusammenhang mit neuroentwicklungsbedingten Fehlregulationen sowie in mehreren Tumorarten beschrieben, wo sie Veränderungen des Differenzierungszustands und des invasiven Verhaltens widerspiegeln kann. Diese Eigenschaften machen DLX2 zu einem geeigneten Knotenpunkt, um entwicklungsbiologische Genregulationsschaltkreise und krankheitsassoziierte transkriptionelle Reprogrammierung in humanen Zellen zu untersuchen.

Dlx-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DLX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Dlx-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DLX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DLX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Dlx-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DLX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Dlx-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Dlx-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DLX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.