Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DJ-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401006-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DJ-1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DJ-1 Double Nickase Plasmid (h) e il DJ-1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PARK7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DJ-1 Antibody (D-4): sc-55572
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DJ-1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401006-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DJ-1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401006-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PARK7 codifica DJ-1, una proteina citoprotettiva multifunzionale che agisce come sensore e modulatore redox‑sensibile delle risposte allo stress ossidativo. DJ-1 partecipa all’omeostasi mitocondriale, alla proteostasi e alla regolazione trascrizionale, con collegamenti riportati alla segnalazione PI3K/AKT, ad attività di tipo chaperone e alla regolazione della gestione delle specie reattive dell’ossigeno. Nei sistemi neurali e non neurali, DJ-1 influenza la suscettibilità allo stress ossidativo e metabolico, collegando la biologia di PARK7 a vie implicate nella neurodegenerazione e nell’adattamento cellulare allo stress. Un’alterazione della funzione o dell’espressione di PARK7/DJ-1 è stata associata a meccanismi legati alla malattia di Parkinson e a contesti più ampi in cui la disfunzione mitocondriale e lo squilibrio redox determinano la sopravvivenza cellulare.
DJ-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PARK7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PARK7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PARK7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PARK7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.