DIP2C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411642-ACT

La DIP2C umana (disco-interacting protein 2 homolog C) è una proteina associata al nucleo, implicata nella regolazione dell’espressione genica legata alla cromatina e nel mantenimento dei programmi di identità cellulare. Le funzioni riportate collegano i membri della famiglia DIP2 al controllo epigenetico, a processi associati alla metilazione del DNA e a reti trascrizionali correlate alla differenziazione che modellano la proliferazione e l’impegno di linea cellulare. Alterazioni dell’espressione di DIP2C e variazioni del numero di copie sono state osservate in diversi contesti tumorali, a sostegno della sua rilevanza negli stati trascrizionali deregolati e nel rimodellamento regolatorio su scala genomica. Queste caratteristiche rendono DIP2C un bersaglio utile per studiare il controllo trascrizionale, le transizioni dello stato cellulare e i circuiti regolatori rilevanti per il cancro nelle cellule umane.

DIP2C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DIP2C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DIP2C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DIP2C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DIP2C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DIP2C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DIP2C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DIP2C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DIP2C nelle cellule tumorali con espressione di DIP2C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.