DENND2A Plasmide Double Nickase (h): sc-411968-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DENND2A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DENND2A Double Nickase Plasmid (h) e il DENND2A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DENND2A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DENND2A Plasmide Double Nickase (h) | sc-411968-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DENND2A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411968-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DENND2A (DENN domain containing 2A) codifica un fattore citosolico di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) che attiva le GTPasi Rab coinvolte nel traffico di membrana, con ruoli riportati nella regolazione del trasporto dipendente da Rab9 e delle dinamiche endosoma-Golgi. Attraverso queste vie di trasporto vescicolare, DENND2A contribuisce allo smistamento del carico intracellulare, all’organizzazione delle membrane e alla compartimentalizzazione della segnalazione, aspetti che possono influenzare la polarità e la motilità cellulare. Un’espressione alterata o una deregolazione di DENND2A è stata studiata nel contesto della biologia tumorale, dove cambiamenti nei programmi di traffico e migrazione possono incidere su fenotipi legati all’invasione. In quanto regolatore del traffico, DENND2A rappresenta un bersaglio utile per studi meccanicistici che collegano il trasporto mediato da Rab al turnover dei recettori, all’omeostasi degli organelli e alla segnalazione in risposta allo stress.
DENND2A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DENND2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DENND2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DENND2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DENND2A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.