Dectin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417053-ACT

Il gene umano **CLEC7A** codifica **Dectin-1**, un recettore lectinico di tipo C espresso in modo prominente dalle cellule mieloidi, che riconosce i **β-glucani** della parete cellulare fungina e alcuni ligandi endogeni selezionati. In seguito al legame con il ligando, Dectin-1 trasduce il segnale attraverso un motivo simile a **ITAM** per attivare **SYK**, le vie **CARD9–BCL10–MALT1**, **NF-κB** e **MAPK**, coordinando fagocitosi, burst respiratorio, produzione di citochine e risposte associate all’inflammasoma. Questo recettore modula inoltre il cross-talk con i recettori **Toll-like** e influenza la presentazione dell’antigene e la comunicazione innata-adattativa orientata verso una polarizzazione **Th17**. Un’attività alterata di CLEC7A/Dectin-1 è stata associata a suscettibilità alle infezioni fungine, a una deregolazione della segnalazione infiammatoria e a fenotipi del microambiente tumorale–mieloide rilevanti per l’immunologia e la ricerca ospite–patogeno.

Dectin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLEC7A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dectin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLEC7A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLEC7A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dectin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLEC7A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dectin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dectin-1 nelle cellule tumorali con espressione di CLEC7A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.