DDX60 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408255-LAC

DDX60 codifica un’elicasi dell’RNA della famiglia DExD/H-box inducibile dagli interferoni, che funge da sensore citosolico e amplificatore dell’immunità innata antivirale. Partecipa alla segnalazione dei recettori simili a RIG-I e alle vie dell’interferone di tipo I promuovendo il riconoscimento e l’elaborazione dell’RNA virale e potenziando i programmi trascrizionali a valle che limitano la replicazione. Attraverso le sue attività di legame all’RNA ed elicasi, DDX60 influenza il metabolismo dell’RNA e l’entità dell’espressione degli ISG durante lo stress cellulare e l’infezione. Un’espressione deregolata di DDX60 è stata associata ad alterazioni delle risposte antivirali e della segnalazione infiammatoria, rendendolo rilevante per lo studio delle interazioni ospite–patogeno e dei meccanismi delle malattie associate al sistema immunitario.

Le particelle di attivazione lentivirale DDX60 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DDX60 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DDX60 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DDX60, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DDX60. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DDX60 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.