DDR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400517-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DDR1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DDR1 Double Nickase Plasmid (h) e il DDR1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DDR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DDR1 Antibody (C-6): sc-374618
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DDR1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400517-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDR1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400517-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDR1 (discoidin domain receptor 1) è un recettore tirosin-chinasico attivato dal collagene che funge da sensore della matrice extracellulare, collegando il legame al collagene alla segnalazione intracellulare. Una volta attivato, DDR1 va incontro ad autofosforilazione e attiva vie coinvolte nell’adesione cellulare, nel rimodellamento del citoscheletro, nella migrazione e nella sopravvivenza, con un crosstalk documentato con le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e con la segnalazione delle adesioni focali. L’attività di DDR1 contribuisce alla regolazione delle interazioni epitelio-stroma, dell’organizzazione della membrana basale e del rimodellamento della matrice nell’omeostasi dei tessuti normali. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di DDR1 sono state associate a fibrosi e a invasione e metastasi correlate al tumore, rendendolo un nodo rilevante per lo studio di fenotipi guidati dal microambiente.
DDR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DDR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DDR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DDR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DDR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.