DCC Plasmide Double Nickase (h): sc-401035-NIC

DCC (deleted in colorectal carcinoma) codifica un recettore della netrina-1 appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, che regola la guida assonale, la migrazione neuronale e il rimodellamento del citoscheletro attraverso vie che includono la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e la dinamica delle adesioni focali. In assenza del ligando, DCC può funzionare come recettore di dipendenza, influenzando apoptosi e sopravvivenza cellulare e collegando il rilevamento di segnali extracellulari alle decisioni di segnalazione intracellulare. Oltre al neurosviluppo, DCC contribuisce all’adesione cellulare e alla migrazione direzionale in diversi tessuti, e alterazioni dell’espressione di DCC o perturbazioni genomiche sono state associate alla progressione tumorale, a fenotipi invasivi e ad anomalie dello sviluppo neurologico. Queste caratteristiche rendono DCC un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione dei segnali di guida, sulla morfogenesi e su cambiamenti rilevanti per la malattia nei programmi di motilità e sopravvivenza cellulare.

DCC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.