DABP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405222

Panoramica

Il gene umano **DBP** codifica la **proteina legante la vitamina D** (DABP, nota anche come *group-specific component*), una glicoproteina plasmatica altamente abbondante che trasporta i metaboliti della vitamina D e contribuisce alla regolazione della loro biodisponibilità. Oltre alla funzione di trasporto, la DABP partecipa alla rimozione dell’actina (*actin scavenging*) durante il danno tissutale e si interfaccia con i processi dell’immunità innata attraverso attività correlate all’attivazione dei macrofagi. Le variazioni di **DBP** sono state studiate in contesti di alterata omeostasi della vitamina D e di fenotipi infiammatori, a supporto del suo impiego negli studi sul dialogo tra sistema endocrino e sistema immunitario. L’espressione di **DBP** e il legame dei ligandi mediato dalla DABP sono quindi rilevanti per le vie che regolano il metabolismo della vitamina D, le risposte di barriera e al danno tissutale, e la segnalazione infiammatoria sistemica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DABP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DBP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DBP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DBP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DABP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DBP per lo studio della segnalazione di DABP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DBP critici per la funzione di DABP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DBP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DABP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DABP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DBP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DABP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DABP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DBP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DBP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.