Dab2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400979-ACT

Disabled homolog 2 (DAB2) codifica a Dab2, uma proteína adaptadora endocítica que acopla a internalização mediada por clatrina ao tráfego de receptores e à atenuação de sinais. A Dab2 participa de vias que regulam a sinalização de TGF-β, a modulação de Wnt/β-catenina e a adesão e migração celular dependentes de integrinas, ao organizar complexos proteicos próximos à membrana. Por meio de efeitos sobre a polaridade epitelial, programas de diferenciação e o turnover de receptores de fatores de crescimento, alterações na expressão de DAB2 têm sido associadas a fenótipos de progressão tumoral e a comportamentos celulares relacionados à metástase em múltiplos contextos teciduais. A Dab2 também contribui para processos mais amplos de transporte vesicular que influenciam a responsividade celular a sinais extracelulares.

Dab2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DAB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dab2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DAB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DAB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dab2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DAB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dab2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dab2 em células tumorais com expressão de DAB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.