CYP4F8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411598-ACT

Il gene umano **CYP4F8** codifica una monoossigenasi del citocromo P450 che contribuisce al metabolismo ossidativo di mediatori derivati dagli acidi grassi, favorendo la regolazione della segnalazione lipidica locale e la biotrasformazione degli xenobiotici. Come parte della più ampia famiglia **CYP4**, CYP4F8 è associato a reazioni di **ω-idrossilazione** che possono influenzare il turnover degli eicosanoidi e il tono infiammatorio, intersecandosi con vie che regolano l’omeostasi epiteliale e le risposte cellulari allo stress. Le variazioni nell’attività e nell’espressione dei citocromi P450 sono spesso studiate nel contesto delle differenze interindividuali nel metabolismo e nella suscettibilità a fenotipi associati all’infiammazione, rendendo CYP4F8 un bersaglio utile negli studi meccanicistici. Modelli in vitro che sfruttano la modulazione di CYP4F8 possono aiutare a chiarire come il metabolismo dei mediatori lipidici plasmi reti di segnalazione rilevanti per la fisiologia specifica dei tessuti.

CYP4F8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYP4F8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP4F8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYP4F8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYP4F8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP4F8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYP4F8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP4F8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP4F8 nelle cellule tumorali con espressione di CYP4F8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.