CYP3A5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401306-NIC

CYP3A5 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 che catalizza il metabolismo ossidativo di una varietà di xenobiotici e substrati endogeni, contribuendo alla biotrasformazione di fase I nel reticolo endoplasmatico. Come parte delle reti enzimatiche epatiche ed extraepatiche deputate al metabolismo dei farmaci, CYP3A5 influenza i percorsi che regolano l’omeostasi di steroidi e lipidi, oltre alla clearance di sostanze chimiche ambientali. La variabilità interindividuale nell’espressione e nell’attività di CYP3A5 è un determinante importante del fenotipo metabolico e può modificare l’esposizione ai substrati di CYP3A in modelli cellulari e di organoidi. Il metabolismo dipendente da CYP3A5, quando disfunzionale, è stato studiato in contesti quali la suscettibilità ai tossici e le alterazioni della funzione epatica associate a malattia, nonché i programmi trascrizionali legati all’infiammazione.

CYP3A5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP3A5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP3A5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP3A5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP3A5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.