CYP3A4 Plasmide Double Nickase (h): sc-416463-NIC

CYP3A4 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 eme-tiolate che catalizza il metabolismo ossidativo di un’ampia gamma di xenobiotici e di substrati endogeni, inclusi steroidi, acidi biliari e acidi grassi. Agisce principalmente nel reticolo endoplasmatico e si integra nelle reti epatiche e intestinali del metabolismo dei farmaci, coordinando la biotrasformazione di Fase I con le vie a valle di detossificazione e trasporto. L’attività di CYP3A4 è regolata dalla segnalazione dei recettori nucleari, tra cui PXR e CAR, collegando programmi trascrizionali sensibili all’esposizione alla capacità metabolica. La variabilità interindividuale nell’espressione o nella funzione di CYP3A4 è un determinante importante delle interazioni farmaco–farmaco e di fenotipi metabolici alterati studiati in contesti di malattia epatica, infiammazione e riprogrammazione metabolica associata al cancro.

CYP3A4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP3A4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP3A4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP3A4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP3A4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.