CYP2E1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419917-ACT

Il gene murino Cyp2e1 codifica l’enzima del citocromo P450 CYP2E1, una monoossigenasi microsomiale che ossida piccoli substrati organici, tra cui etanolo, acetone e altri xenobiotici a basso peso molecolare. L’attività di CYP2E1 contribuisce al metabolismo di fase I e può aumentare la produzione di specie reattive dell’ossigeno (ROS), collegandola allo stress ossidativo, alla perossidazione lipidica e alle risposte allo stress del reticolo endoplasmatico negli epatociti. Nel fegato, CYP2E1 interagisce con vie che regolano l’eliminazione degli xenobiotici, l’omeostasi redox e la segnalazione infiammatoria. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di Cyp2e1 sono frequentemente studiate in modelli di danno epatico indotto da tossici, disfunzione metabolica e patologia epatica associata all’alcol, per comprendere come l’attivazione metabolica e i ROS guidino il danno tissutale.

CYP2E1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cyp2e1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP2E1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cyp2e1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp2e1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP2E1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cyp2e1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP2E1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP2E1 nelle cellule tumorali con espressione di Cyp2e1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.