CYP2C19 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404808-ACT

ヒトCYP2C19は、小胞体において多様な外来性化合物（ゼノバイオティクス）および内因性基質の酸化的生体内変換を触媒するシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードしています。第I相代謝の一部として、CYP2C19はNADPH–シトクロムP450還元酵素を介したレドックスサイクリングを担い、下流の抱合反応やクリアランス経路に影響し得る代謝フラックスを形成します。CYP2C19の発現量および活性の変動は、薬物代謝、化学物質感受性、ならびにファーマコゲノミクス関連疾患における有害反応への感受性の個人差と関連しています。CYP2C19の制御は、肝細胞分化、核内受容体シグナル伝達ネットワーク、そして代謝能を変化させる炎症駆動性の転写リプログラミングという文脈でも研究されています。

CYP2C19 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP2C19の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP2C19 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP2C19 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP2C19転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP2C19の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP2C19遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP2C19依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP2C19発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP2C19経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。