CYP2A13 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403450

Panoramica

CYP2A13 codifica una monoossigenasi umana del citocromo P450 coinvolta prevalentemente nel metabolismo ossidativo di xenobiotici e substrati endogeni. Come parte della rete di enzimi di fase I deputati al metabolismo dei farmaci, CYP2A13 contribuisce al trasferimento di elettroni dipendente da NADPH in collaborazione con la citocromo P450 reduttasi e catalizza reazioni che influenzano l’equilibrio redox cellulare e la formazione di metaboliti reattivi. Il gene è altamente espresso nei tessuti del tratto respiratorio ed è implicato nella bioattivazione e nella detossificazione di composti inalati, collegando la sua attività a vie rilevanti per le risposte allo stress dell’epitelio polmonare. Variazioni nell’espressione o nell’attività di CYP2A13 sono state associate a differenze interindividuali nella gestione degli xenobiotici e nella suscettibilità al danno tissutale indotto da sostanze chimiche, a supporto della sua rilevanza nei modelli di ricerca in tossicologia e carcinogenesi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2A13 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYP2A13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYP2A13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYP2A13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP2A13.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYP2A13 per lo studio della segnalazione di CYP2A13, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CYP2A13 critici per la funzione di CYP2A13
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYP2A13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYP2A13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CYP2A13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYP2A13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYP2A13 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CYP2A13 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYP2A13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYP2A13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.