CYP11B2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419894

Panoramica

Cyp11b2 codifica CYP11B2 (aldosterone sintasi), un enzima mitocondriale del citocromo P450 che catalizza le fasi terminali della biosintesi dell’aldosterone a partire dal deossicorticosterone. Questa attività rientra nella via steroidogenica, accoppiando il trasferimento di elettroni da adrenodossina/adrenodossina reduttasi a reazioni ossidative che regolano la produzione di mineralcorticoidi e, a valle, l’omeostasi di elettroliti e fluidi. Nelle cellule della zona glomerulosa del surrene di topo, CYP11B2 integra segnali ormonali, inclusi programmi calcio-dipendenti e responsivi all’angiotensina II, per modulare la produzione di steroidi. Un’espressione deregolata di Cyp11b2 o un eccesso di aldosterone sono associati a fisiologia cardiovascolare e renale maladattativa, rendendo il gene rilevante per studi meccanicistici sul controllo endocrino e sul rimodellamento metabolico in risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP11B2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cyp11b2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cyp11b2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cyp11b2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYP11B2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cyp11b2 per lo studio della segnalazione di CYP11B2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cyp11b2 critici per la funzione di CYP11B2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cyp11b2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYP11B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CYP11B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cyp11b2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYP11B2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CYP11B2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cyp11b2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cyp11b2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.