cyclin C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402308-ACT

Il gene umano **CCNC** codifica la ciclina C, una ciclina trascrizionale che si associa a **CDK8** o **CDK19** all’interno del modulo chinasi del **Mediator** per modulare la trascrizione dipendente dalla **RNA polimerasi II**. Attraverso la regolazione di programmi genici responsivi agli stimoli, la ciclina C influenza la progressione del ciclo cellulare, l’adattamento metabolico e la segnalazione da stress, incluse le vie che governano la dinamica mitocondriale e l’apoptosi. L’attività di **CCNC** interseca le reti trascrizionali **WNT/β-catenina**, **TGF-β** e **NF-κB**, collegando la segnalazione del modulo chinasi del Mediator a processi di sviluppo e infiammatori. Una funzione deregolata del complesso **CCNC/CDK8–Mediator** è stata associata a stati trascrizionali alterati osservati nel cancro e in altre malattie caratterizzate da un controllo dell’espressione genica compromesso.

cyclin C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCNC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cyclin C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCNC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCNC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cyclin C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCNC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cyclin C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cyclin C nelle cellule tumorali con espressione di CCNC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.