CX3CR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401206-ACT

CX3CR1 codifica il recettore 1 per le chemochine CX3C, un GPCR a sette domini transmembrana che lega la fractalkina (CX3CL1) per regolare la chemiotassi, l’adesione e la sorveglianza tissutale dei leucociti. La segnalazione mediata da CX3CR1 influenza il traffico infiammatorio e i programmi delle cellule mieloidi attraverso vie a valle dei GPCR che convergono sulla mobilizzazione del Ca2+, sulla segnalazione MAPK e sul rimodellamento del citoscheletro. Nella biologia umana, CX3CR1 è studiato in modo particolare nella microglia e in sottopopolazioni di monociti, dove modula la comunicazione neuro-immunitaria e le interazioni tra sistema vascolare e sistema immunitario. Alterazioni dell’attività dell’asse CX3CR1–CX3CL1 sono state associate all’infiammazione cronica e a processi rilevanti per la neurodegenerazione, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici del comportamento delle cellule immunitarie in contesti di malattia.

CX3CR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CX3CR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CX3CR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CX3CR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CX3CR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CX3CR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CX3CR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CX3CR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CX3CR1 nelle cellule tumorali con espressione di CX3CR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.