CX3CR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401206-ACT

CX3CR1 codifica o receptor de quimiocina CX3C 1, um GPCR de sete domínios transmembrana que se liga à fractalquina (CX3CL1) para regular a quimiotaxia, a adesão e a vigilância tecidual de leucócitos. A sinalização de CX3CR1 influencia o recrutamento inflamatório e programas de células mieloides por meio de vias ligadas a GPCR que convergem na mobilização de Ca2+, na sinalização por MAPK e na remodelação do citoesqueleto. Na biologia humana, CX3CR1 é amplamente estudado em micróglia e em subpopulações de monócitos, onde molda a comunicação neuroimune e as interações entre o sistema vascular e o sistema imune. Alterações na atividade do eixo CX3CR1–CX3CL1 têm sido associadas à inflamação crônica e a processos relevantes para a neurodegeneração, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos do comportamento de células imunes em contextos de doença.

CX3CR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CX3CR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CX3CR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CX3CR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CX3CR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CX3CR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CX3CR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CX3CR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CX3CR1 em células tumorais com expressão de CX3CR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.