CUL-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-416925-NIC

CUL3 codifica la cullina-3 (CUL-3), un’impalcatura centrale dei complessi ligasi E3 dell’ubiquitina CRL3, che reclutano adattatori di substrato con dominio BTB per indirizzare la degradazione proteasomiale dipendente dall’ubiquitina. Attraverso la degradazione regolata di proteine coinvolte nella segnalazione e nella risposta allo stress, CUL-3 contribuisce a controllare la progressione del ciclo cellulare, le vie dello stress ossidativo (incluse KEAP1–NRF2), la dinamica del citoscheletro e la segnalazione dell’immunità innata. Un’alterata attività di CUL3 può rimodellare l’omeostasi proteica e i programmi trascrizionali, influenzando vie collegate alla segnalazione oncogenica, al neurosviluppo e all’adattamento cellulare allo stress. Nella genetica umana, varianti di CUL3 e la disregolazione dei CRL3 sono associate a meccanismi legati all’ipertensione e a più ampie alterazioni rilevanti per la malattia nella segnalazione mediata dall’ubiquitina.

CUL-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CUL3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CUL3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CUL3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CUL3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.