CstF-64T Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406358

Panoramica

CSTF2T codifica CstF-64T, una subunità legante l’RNA del complesso del fattore di stimolazione del taglio (cleavage stimulation factor), che dirige la maturazione dell’estremità 3′ e la poliadenilazione dei pre-mRNA. Influenzando la scelta del sito di taglio e la poliadenilazione alternativa, CstF-64T contribuisce alla diversità delle isoforme trascrizionali, alla stabilità dell’mRNA e al controllo della traduzione, con effetti a valle sullo stato cellulare e sui programmi di differenziamento. La sua attività è particolarmente rilevante nel contesto della linea germinale e in modelli in cui variazioni della lunghezza della 3′ UTR rimodellano la regolazione post-trascrizionale. La disregolazione del macchinario di taglio e poliadenilazione, incluse le vie legate a CSTF2T, è associata ad ampie alterazioni dell’espressione genica osservate in fenotipi proliferativi e di adattamento allo stress studiati in oncologia e biologia dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CstF-64T (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CSTF2T in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CSTF2T insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CSTF2T a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CstF-64T.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CSTF2T per lo studio della segnalazione di CstF-64T, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CSTF2T critici per la funzione di CstF-64T
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CSTF2T per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CstF-64T CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CstF-64T CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CSTF2T. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CstF-64T Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CstF-64T (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CSTF2T per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CSTF2T definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.