Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CRX Plasmide Double Nickase (h): sc-401736-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CRX Double Nickase Plasmid (h) e il CRX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRX Antibody (A-9): sc-377138
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRX Plasmide Double Nickase (h) | sc-401736-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CRX Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401736-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRX (cone-rod homeobox) codifica un fattore di trascrizione con dominio omeobox, specifico della retina, essenziale per la differenziazione e il mantenimento dei fotorecettori. Nel nucleo, CRX coordina programmi di regolazione genica che controllano i componenti della fototrasduzione, la biogenesi del segmento esterno e la maturazione sinaptica, legandosi a elementi cis-regolatori e cooperando con altri fattori di trascrizione retinici. Modula reti trascrizionali collegate alla segnalazione del cGMP, all’espressione delle opsine e al supporto metabolico necessario per la funzione di coni e bastoncelli. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di CRX sono associate a fenotipi di degenerazione retinica ereditaria, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici sullo sviluppo dei fotorecettori e sulla regolazione genica rilevante per la malattia.
CRX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.