CREB3L1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405316-ACT

CREB3L1 (cAMP responsive element binding protein 3-like 1) è un fattore di trascrizione bZIP ancorato alla membrana che viene attivato tramite proteolisi intramembrana regolata e trasloca nel nucleo per controllare programmi di espressione genica legati allo stress del reticolo endoplasmatico e all’adattamento della via secretoria. Influenza la produzione della matrice extracellulare e le reti trascrizionali associate alla differenziazione, integrando segnali che coordinano la biosintesi del collagene, le risposte allo stress cellulare e la proteostasi. L’attività di CREB3L1 è stata implicata in contesti di rimodellamento tissutale alterato e transizioni dello stato cellulare, rendendolo rilevante per studi meccanicistici su programmi trascrizionali di tipo fibrotico e su cambiamenti associati ai tumori in invasione, metastasi e tolleranza allo stress. In quanto regolatore trascrizionale, rappresenta un nodo sperimentalmente accessibile per analizzare come la segnalazione dello stress del RE intersechi il rimodellamento della matrice e l’espressione genica specifica di linea.

CREB3L1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CREB3L1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CREB3L1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CREB3L1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CREB3L1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CREB3L1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CREB3L1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CREB3L1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CREB3L1 nelle cellule tumorali con espressione di CREB3L1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.