CREB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400160-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CREB1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CREB1 Double Nickase Plasmid (h) e il CREB1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CREB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CREB1 Antibody (X-12): sc-240
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CREB1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400160-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CREB1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400160-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CREB1 codifica la proteina 1 legante l’elemento di risposta al cAMP (cAMP response element-binding protein 1, CREB1), un fattore di trascrizione bZIP che si lega ai motivi CRE per coordinare l’espressione genica dipendente dagli stimoli. CREB1 integra segnali provenienti dalle vie cAMP/PKA, dalle chinasi Ca2+/calmodulina-dipendenti e dalle vie MAPK/ERK, modellando programmi coinvolti nella plasticità neuronale, nel metabolismo, nel controllo del ciclo cellulare e nelle risposte allo stress. Attraverso il reclutamento di coattivatori dipendente dalla fosforilazione (ad es. CBP/p300), CREB1 modula la cromatina e gli output trascrizionali in diversi tipi cellulari. Un’attività deregolata di CREB1 è stata associata ad alterazioni della segnalazione immunitaria e infiammatoria, a fenotipi neuropsichiatrici e a reti trascrizionali oncogeniche, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato negli studi di pathway e dei meccanismi di malattia.
CREB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CREB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CREB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CREB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CREB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.