CRABP-II Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-402978-LAC-2

Il gene umano CRABP2 codifica la cellular retinoic acid–binding protein II (CRABP-II), un trasportatore citosolico ad alta affinità che tampona l’acido retinoico all-trans e ne facilita il trasferimento ai recettori nucleari dell’acido retinoico, contribuendo a plasmare programmi trascrizionali dipendenti dai retinoidi. Controllando la disponibilità del ligando e il traffico subcellulare, CRABP-II influenza la differenziazione epiteliale, la maturazione dei cheratinociti e altri processi guidati dall’acido retinoico, collegandosi così alla regolazione della proliferazione, dell’apoptosi e di reti geniche dello sviluppo. Un’espressione deregolata di CRABP2 e alterazioni della segnalazione dei retinoidi sono state associate alla biologia dei tumori e a disturbi infiammatori della pelle, rendendo questo bersaglio rilevante per studiare il rimodellamento delle vie di segnalazione e risposte all’acido retinoico dipendenti dal contesto. L’editing genetico focalizzato su CRABP2 consente una dissezione meccanicistica della segnalazione dell’acido retinoico, la mappatura dei cambiamenti trascrizionali e cromatinici a valle dell’attivazione dei recettori RAR e lo screening funzionale in modelli di differenziazione e tumorigenesi.

Le particelle di attivazione lentivirale CRABP-II (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CRABP2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CRABP-II (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CRABP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CRABP-II. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CRABP2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.