COL5A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401579-NIC

COL5A1 codifica la catena alfa 1 del collagene di tipo V, un collagene fibrillare quantitativamente minoritario ma funzionalmente cruciale, che regola la fibrillogenesi del collagene e controlla il diametro e l’organizzazione delle fibre di collagene di tipo I/V nella matrice extracellulare. Attraverso il suo ruolo nell’assemblaggio della matrice, COL5A1 influenza la segnalazione cellula–matrice, la resistenza a trazione dei tessuti e i processi di rimodellamento che intersecano l’adesione mediata dalle integrine e le vie che regolano il comportamento dei fibroblasti. Un’alterazione della funzione o dell’espressione di COL5A1 è associata a disordini ereditari del tessuto connettivo, tra cui la sindrome di Ehlers–Danlos classica, ed è frequentemente studiata in contesti legati alla meccanica di cute e tendini, all’integrità vascolare e alla disregolazione della matrice. In quanto determinante strutturale della ECM, è rilevante anche per indagare come l’architettura del collagene moduli lo sviluppo, la riparazione delle ferite e i contributi stromali ai fenotipi di malattia.

COL5A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL5A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL5A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL5A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL5A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.