COL1A2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400598-ACT

COL1A2 codifica la catena pro‑α2(I) del collagene di tipo I, un collagene fibrillare principale che si assembla in eterotrimeri e conferisce resistenza alla trazione ai tessuti connettivi, inclusi derma, tendine, osso e stroma vascolare. La sua espressione è strettamente regolata durante la deposizione e il rimodellamento della matrice extracellulare (ECM), integrandosi con la segnalazione TGF‑β/SMAD, l’adesione mediata da integrine e i percorsi di fibrillogenesi del collagene che modellano l’architettura tissutale e la meccanotrasduzione. Una trascrizione di COL1A2 deregolata o varianti patogene alterano l’assemblaggio del collagene e l’omeostasi della matrice, contribuendo a disturbi ereditari del tessuto connettivo e a fenotipi di rimodellamento fibrotico. Nella ricerca biomedica, COL1A2 funge da marker ed effettore chiave dell’attivazione dei fibroblasti, del turnover dell’ECM e del contributo dello stroma all’infiammazione e ai microambienti tumorali.

COL1A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COL1A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

COL1A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COL1A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COL1A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di COL1A2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COL1A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da COL1A2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via COL1A2 nelle cellule tumorali con espressione di COL1A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.