COL1A2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400598-ACT

COL1A2 codifica a cadeia pro‑α2(I) do colágeno tipo I, um colágeno fibrilar principal que se organiza em heterotrímeros e confere resistência à tração aos tecidos conjuntivos, incluindo derme, tendão, osso e estroma vascular. Sua expressão é rigidamente regulada durante a deposição e o remodelamento da matriz extracelular (MEC), integrando-se à sinalização TGF‑β/SMAD, à adesão mediada por integrinas e às vias de fibrilogênese do colágeno que moldam a arquitetura tecidual e a mecanotransdução. A transcrição desregulada de COL1A2 ou variantes patogênicas comprometem a montagem do colágeno e a homeostase da matriz, contribuindo para doenças hereditárias do tecido conjuntivo e fenótipos de remodelamento fibrótico. Na pesquisa biomédica, COL1A2 atua como um marcador e efetor-chave da ativação de fibroblastos, do turnover da MEC e das contribuições do estroma para a inflamação e para microambientes tumorais.

COL1A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COL1A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL1A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COL1A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COL1A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL1A2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COL1A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL1A2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL1A2 em células tumorais com expressão de COL1A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.