CLN3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404501-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLN3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CLN3 Double Nickase Plasmid (h) e il CLN3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CLN3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLN3 Antibody (C-1): sc-398192
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLN3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404501-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLN3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404501-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLN3 codifica una proteina di membrana lisosomiale/endosomiale multipasso coinvolta nella regolazione del traffico vescicolare, dell’omeostasi dei lisosomi e della funzionalità della via autofagia–lisosoma. Nell’uomo, CLN3 è associata al mantenimento del pH lisosomiale, della composizione di membrana e della rimozione delle macromolecole, collegandola alle risposte allo stress e alla proteostasi cellulare. L’alterazione di CLN3 compromette la dinamica endolisosomiale, con effetti a valle sulla gestione dei lipidi, sulla funzione mitocondriale e sulla segnalazione neuroinfiammatoria in tipi cellulari vulnerabili. Varianti patogene in CLN3 sono associate alla ceroidolipofuscinosi neuronale giovanile (malattia di Batten), rendendo CLN3 un bersaglio chiave per studi meccanicistici sulla disfunzione lisosomiale e su vie rilevanti per la neurodegenerazione.
CLN3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLN3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLN3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLN3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLN3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.