CLCA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-404824-ACT-2

Il gene umano CLCA2 (chloride channel accessory 2) codifica una proteina accessoria di superficie cellulare/secretata implicata nella regolazione della conduttanza al cloruro e del trasporto ionico epiteliale, con ruoli nelle dinamiche di membrana e nella fisiologia associata alla funzione di barriera. L’espressione di CLCA2 è frequentemente collegata a programmi di differenziamento e di risposta allo stress, intersecando processi di segnalazione che influenzano l’adesione cellula-cellula, la migrazione e l’omeostasi epiteliale. La disregolazione di CLCA2 è stata riportata in molteplici contesti oncologici e in altri disturbi epiteliali, a supporto del suo impiego come marcatore molecolare per lo studio delle transizioni fenotipiche associate al tumore e delle risposte al microambiente. L’editing genetico di CLCA2 consente di interrogare i meccanismi alla base della segnalazione correlata al cloruro, del rimodellamento epiteliale e delle reti trascrizionali a valle in modelli cellulari umani.

CLCA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLCA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLCA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLCA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLCA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLCA2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLCA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLCA2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLCA2 nelle cellule tumorali con espressione di CLCA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.