citrate synthase Plasmide Double Nickase (h): sc-402227-NIC

Il gene CS umano codifica la citrato sintasi, un enzima della matrice mitocondriale che catalizza la condensazione di ossalacetato e acetil‑CoA per formare citrato, avviando il flusso attraverso il ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). Controllando l’ingresso nel metabolismo ossidativo, la citrato sintasi sostiene la produzione di NADH/FADH2 per la catena di trasporto degli elettroni e influenza i processi di anaplerosi/cataplerosi che collegano il metabolismo di carboidrati, lipidi e amminoacidi. L’attività di CS si interseca con la bioenergetica mitocondriale, l’omeostasi redox e processi biosintetici dipendenti dal citrato, come la sintesi degli acidi grassi e degli steroli. Un metabolismo mitocondriale alterato che coinvolge la funzione del ciclo TCA viene spesso esaminato in contesti quali la disregolazione metabolica, la neurodegenerazione e fenotipi proliferativi in cui la capacità mitocondriale e l’utilizzo dei substrati vengono rimodellati.

citrate synthase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.