Chr-B Plasmide Double Nickase (h): sc-401478-NIC

CHGB codifica la cromogranina B (Chr-B), una delle principali proteine granine acide localizzate nei granuli secretori a nucleo denso nelle cellule neuroendocrine e nei neuroni. Chr-B partecipa alla biogenesi della via secretoria regolata e allo smistamento del carico, influenza l’acidificazione dei granuli e la gestione del Ca²⁺, e può essere processata proteoliticamente in peptidi bioattivi che modulano la segnalazione neuroendocrina. Grazie al suo ruolo nella secrezione accoppiata allo stimolo, CHGB è comunemente studiato nei circuiti che controllano il rilascio di ormoni e neurotrasmettitori, la maturazione delle vescicole e l’esocitosi. Alterazioni dell’espressione di CHGB o disfunzioni dei granuli sono state riportate in molteplici contesti di malattie neuroendocrine e neurologiche, stimolando studi meccanicistici sui fenotipi di secrezione e sulla segnalazione responsiva allo stress in modelli cellulari pertinenti.

Chr-B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHGB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHGB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHGB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHGB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.