Centrin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400867

Panoramica

CETN2 codifica la centrin-2, una proteina conservata legante il calcio con motivo EF-hand che si localizza a centrosomi e corpi basali e contribuisce alla duplicazione dei centrioli, all’integrità del centrosoma e all’organizzazione del fuso durante la divisione cellulare. La centrin-2 partecipa anche all’assemblaggio e alla funzione del ciglio primario, collegando l’attività di CETN2 al controllo del ciclo cellulare e a processi basati sui microtubuli come la ciliogenesi. Attraverso i suoi ruoli nell’omeostasi del centrosoma e nelle reti di segnalazione ciliare, alterazioni della dinamica della centrin-2 possono influenzare la stabilità genomica e i programmi di differenziamento cellulare, spesso perturbati nel cancro e nella biologia correlata alle ciliopatie. CETN2 è quindi ampiamente utilizzato come strumento molecolare per interrogare le vie associate al centrosoma, la fedeltà mitotica e gli output di segnalazione dipendenti dalle ciglia nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Centrin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CETN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CETN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CETN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Centrin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CETN2 per lo studio della segnalazione di Centrin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CETN2 critici per la funzione di Centrin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CETN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Centrin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Centrin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CETN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Centrin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Centrin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CETN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CETN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.