CEACAM1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424008-ACT

Il gene murino Ceacam1 codifica CEACAM1, un recettore di adesione cellulare della superfamiglia delle immunoglobuline che media interazioni omofiliche ed eterofiliche sulla superficie cellulare e contribuisce a coordinare l’organizzazione epiteliale e la comunicazione intercellulare. Attraverso i suoi motivi di segnalazione citoplasmatici e funzioni specifiche delle diverse isoforme, CEACAM1 modula reti di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione che influenzano la polarità cellulare, il controllo della proliferazione e gli stati di attivazione delle cellule immunitarie. CEACAM1 è implicata in processi quali le interazioni leucocita–endotelio, la regolazione della barriera mucosale e il rimodellamento tissutale, collegandola a fenotipi associati all’infiammazione e ad alterazioni dell’omeostasi epiteliale. Un’espressione deregolata di CEACAM1 è stata associata a disfunzioni immunitarie e a cambiamenti, rilevanti per il cancro, nell’adesione e nella segnalazione, supportando studi meccanicistici in oncologia, immunologia e in modelli dell’interfaccia ospite–microbo.

CEACAM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ceacam1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CEACAM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ceacam1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ceacam1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CEACAM1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ceacam1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CEACAM1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CEACAM1 nelle cellule tumorali con espressione di Ceacam1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.