Cdx2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419618-ACT

Cdx2 (caudal type homeobox 2) codifica un fattore di trascrizione homeobox che stabilisce e mantiene la patterning posteriore del corpo durante l’embriogenesi ed è un regolatore chiave della specificazione del trofoectoderma e della differenziazione dell’epitelio intestinale nel topo. Legandosi a motivi di DNA specifici di sequenza, CDX2 coordina programmi trascrizionali che si interfacciano con la segnalazione Wnt/β-catenina, la polarità epiteliale e l’impegno di linea, influenzando la proliferazione e la maturazione dell’epitelio intestinale. Un’espressione deregolata di CDX2 è stata associata a stati di differenziazione alterati e a un’identità epiteliale aberrante, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo meccanicistico negli studi sui disturbi dello sviluppo e sulla biologia delle patologie gastrointestinali. In vitro, Cdx2 viene spesso sfruttato per modellare transizioni di destino cellulare, la maturazione degli organoidi e la dinamica delle reti trascrizionali in sistemi di cellule staminali e progenitrici.

Cdx2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cdx2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cdx2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cdx2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cdx2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdx2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cdx2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdx2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdx2 nelle cellule tumorali con espressione di Cdx2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.