Cdx2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401220-ACT

CDX2 codifica il fattore di trascrizione homeobox di tipo caudal Cdx2, un regolatore chiave dello sviluppo intestinale, della differenziazione epiteliale e del mantenimento dei programmi di patterning antero‑posteriore. Cdx2 controlla reti geniche coinvolte nella specificazione del destino cellulare, nella funzione di barriera e in programmi trascrizionali ristretti a specifiche linee cellulari nei tessuti gastrointestinali, integrandosi con i contesti di segnalazione associati a Wnt/β‑catenina, BMP e Notch. Un’espressione deregolata di CDX2 o un’alterazione dei circuiti trascrizionali dipendenti da CDX2 è stata associata a stati di differenziazione aberranti e a patologie gastrointestinali, e CDX2 è ampiamente utilizzato come marcatore dell’identità di linea intestinale nei sistemi modello umani. In quanto fattore di legame al DNA con specificità di sequenza, Cdx2 rappresenta un nodo facilmente interrogabile per analizzare l’uso degli enhancer, le transizioni dello stato della cromatina e il rimodellamento delle reti trascrizionali durante la plasticità epiteliale.

Cdx2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cdx2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdx2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdx2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdx2 nelle cellule tumorali con espressione di CDX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.