CDw75/ST6GAL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402881-NIC

ST6GAL1 (CDw75) codifica la β-galattoside α-2,6-sialiltransferasi 1, un enzima localizzato nel Golgi che catalizza la sialilazione terminale α2,6 dei glicani N-legati su glicoproteine di membrana e secrete. Questa modifica influenza il ripiegamento delle glicoproteine, la stabilità dei recettori e il riconoscimento dei ligandi, incidendo sulle interazioni cellula–cellula, sulla modulazione immunitaria e sulla trasduzione del segnale attraverso eventi di legame dipendenti dai glicani. L’attività di ST6GAL1 contribuisce alla regolazione del glicoma di superficie di cellule B ed epiteliali e influisce su processi quali adesione, migrazione e apoptosi. Un’espressione deregolata di ST6GAL1 e pattern alterati di α2,6-sialilazione sono stati associati a cambiamenti del comportamento delle cellule tumorali, infiammazione e suscettibilità alle infezioni, rendendolo un nodo chiave per la glicobiologia e lo studio dei meccanismi di malattia.

CDw75/ST6GAL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ST6GAL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ST6GAL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ST6GAL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ST6GAL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.