Cdc37 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401574-LAC

CDC37 codifica Cdc37, un co-chaperone che collabora con HSP90 per stabilizzare e far maturare un ampio insieme di chinasi proteiche, favorendone il corretto ripiegamento, l’assemblaggio dei complessi e la protezione dalla degradazione proteasomiale. Attraverso questa rete chaperone–cliente, Cdc37 influenza vie di segnalazione fondamentali, tra cui MAPK/ERK, PI3K–AKT e il controllo del ciclo cellulare, modellando così le risposte guidate dalla fosforilazione a stimoli di stress e di crescita. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CDC37 sono state associate a una disregolazione dell’omeostasi delle chinasi e a squilibri di segnalazione osservati in molti tumori e in altri contesti patologici dipendenti dalle chinasi. In quanto nodo centrale della proteostasi, CDC37 è spesso oggetto di studio per il suo impatto sulla robustezza della segnalazione, sulla fitness cellulare e sull’adattamento allo stress proteotossico.

Le particelle di attivazione lentivirale Cdc37 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CDC37 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Cdc37 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CDC37, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Cdc37. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CDC37 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.