CD98 Plasmide Double Nickase (h): sc-400501-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD98 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD98 Double Nickase Plasmid (h) e il CD98 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC3A2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD98 Antibody (E-5): sc-376815
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD98 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400501-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD98 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400501-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC3A2 codifica CD98 (nota anche come catena pesante 4F2), una glicoproteina di membrana di tipo II che forma eterodimeri con le catene leggere SLC7 per supportare il trasporto di aminoacidi e il sensing dei nutrienti a livello cellulare. CD98 modula inoltre l’adesione e la segnalazione dipendenti dalle integrine, collegando il trasporto di membrana all’organizzazione del citoscheletro, alla proliferazione e a vie di sopravvivenza come PI3K–AKT e MAPK. Attraverso questi ruoli, SLC3A2 influenza l’equilibrio redox e i programmi metabolici regolati da mTORC1 che modellano la crescita e le risposte allo stress. Un’espressione e una segnalazione di CD98 deregolate sono state associate ad alterazioni della migrazione cellulare, dell’attivazione delle cellule immunitarie e a caratteristiche della biologia tumorale, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici su metabolismo e segnalazione dell’adesione.
CD98 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC3A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC3A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC3A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC3A2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.