CD8-β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400950

Panoramica

CD8B codifica CD8-β, una glicoproteina transmembrana di tipo I che eterodimerizza con CD8-α formando il co-recettore CD8 sui linfociti T citotossici e su specifiche sottopopolazioni di timociti. Legandosi alle molecole MHC di classe I e associandosi a LCK, CD8-β aumenta l’intensità del segnale del TCR, sostenendo l’attivazione antigene-specifica, la formazione della sinapsi immunologica e le vie a valle che controllano proliferazione, produzione di citochine e differenziazione degli effettori citolitici. L’espressione di CD8B contribuisce alla selezione timica e al mantenimento dell’identità dei linfociti T CD8+, influenzando la sorveglianza immunitaria e le risposte alle infezioni. Una segnalazione deregolata del co-recettore CD8 e pattern alterati di espressione di CD8B sono rilevanti negli studi su autoimmunità, infiammazione cronica, immunologia tumorale e fenotipi di esaurimento dei linfociti T.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CD8B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CD8B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CD8B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD8-β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CD8B per lo studio della segnalazione di CD8-β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CD8B critici per la funzione di CD8-β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CD8B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD8-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD8-β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CD8B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD8-β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD8-β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CD8B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CD8B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.