CD79A Plasmide Double Nickase (h): sc-401827-NIC

CD79A codifica la subunità Ig-alfa del complesso del recettore dell’antigene delle cellule B (BCR), formando un eterodimero di segnalazione con CD79B che collega il legame dell’antigene alle cascate di attivazione intracellulari. Attraverso i suoi motivi di attivazione basati su tirosina degli immunorecettori (ITAM), CD79A sostiene il reclutamento di SYK dipendente dalla fosforilazione e la propagazione di vie a valle, tra cui PI3K–AKT, NF-κB e MAPK, modulando lo sviluppo, l’attivazione e la sopravvivenza delle cellule B. Un’alterata espressione di CD79A o una ridotta competenza di segnalazione è associata a reti di segnalazione del BCR deregolate, implicate nelle immunodeficienze delle cellule B e nella biologia delle neoplasie delle cellule B. In quanto marcatore ristretto alla linea, CD79A è inoltre ampiamente utilizzato per studiare l’identità delle cellule B, gli stati di differenziazione e le risposte di segnalazione guidate dall’antigene in modelli immunitari umani.

CD79A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD79A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD79A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD79A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD79A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.