CD69 Plasmide Double Nickase (h): sc-416315-NIC

CD69 codifica un antigene di attivazione precoce espresso sulla superficie di cellule T, cellule B, cellule NK e altri leucociti, dove funziona come recettore lectinico di tipo C che segnala rapidamente l’attivazione immunitaria. CD69 partecipa a programmi di segnalazione e di interazione cellula–cellula che modellano la ritenzione e la migrazione dei linfociti, inclusa la modulazione dell’uscita dipendente dal recettore della sfingosina-1-fosfato (S1PR1) e il coordinamento della residenza tissutale. Attraverso il suo impatto sulle soglie di attivazione, sulle risposte citochiniche e sulla dinamica della sinapsi immunologica, CD69 è spesso studiato nei percorsi che regolano infiammazione, tolleranza immunitaria e difesa dell’ospite. Alterazioni nei pattern di espressione di CD69 sono state riportate in diverse malattie immunomediate e in ambiti di immunologia dei tumori, a supporto del suo impiego come marcatore meccanicistico e nodo funzionale negli studi sulla biologia dei leucociti.

CD69 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD69 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD69. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD69. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD69 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.