CD69 Plasmide di attivazione CRISPR (m2): sc-419566-ACT-2

Il gene murino Cd69 codifica CD69, un recettore di superficie inducibile di tipo lectinico C, rapidamente sovraregolato in seguito alla stimolazione del recettore dell’antigene o di citochine, che funge da marcatore precoce dell’attivazione dei linfociti. CD69 modula il traffico delle cellule immunitarie e la loro ritenzione nei tessuti, in parte attraverso la regolazione della segnalazione del recettore della sfingosina-1-fosfato, e influenza programmi di attivazione a valle, inclusi risposte associate a NF-κB e MAPK, che plasmano la funzione effettrice delle cellule T e delle cellule NK. Un’attività alterata di CD69 è stata collegata a disregolazione immunitaria in modelli di infiammazione, autoimmunità e immunologia dei tumori, riflettendo il suo ruolo nel bilanciare segnali di attivazione e di migrazione. L’editing del gene Cd69 nei sistemi murini supporta studi meccanicistici sulla cinetica di attivazione, sulla biologia delle cellule immunitarie residenti nei tessuti e su analisi delle perturbazioni di via in cellule primarie o in modelli di immunologia in vivo.

CD69 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cd69 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD69 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cd69 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cd69, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD69. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cd69 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD69 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD69 nelle cellule tumorali con espressione di Cd69 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.