CD5 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419560-ACT

Il gene Cd5 del topo codifica CD5, una glicoproteina di superficie appartenente alla famiglia dei recettori scavenger ricchi in cisteine, che modula la segnalazione del recettore dell’antigene nelle cellule T e in un sottogruppo di cellule B. CD5 partecipa all’organizzazione della sinapsi immunologica e calibra le soglie di attivazione integrando i segnali a valle del recettore delle cellule T e delle vie chinasi associate della famiglia Src, influenzando la produzione di citochine e la sopravvivenza dei linfociti. In virtù del suo ruolo nel mantenimento dell’omeostasi immunitaria e della tolleranza periferica, un’alterata espressione o segnalazione di CD5 è stata associata a un’attivazione linfocitaria deregolata e a fenotipi immunitari infiammatori. Cd5 rappresenta quindi un utile strumento molecolare per studiare i feedback di segnalazione, la differenziazione linfocitaria e i meccanismi che modellano le risposte immunitarie adattative nei modelli murini.

CD5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cd5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cd5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cd5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cd5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD5 nelle cellule tumorali con espressione di Cd5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.