CD40 Plasmide Double Nickase (h): sc-400524-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD40 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD40 Double Nickase Plasmid (h) e il CD40 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD40. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD40 Antibody (H-10): sc-13128
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD40 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400524-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD40 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400524-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD40 codifica un membro della superfamiglia dei recettori del TNF espresso sulle cellule presentanti l’antigene, incluse cellule B, cellule dendritiche e macrofagi, dove integra segnali costimolatori che modellano l’immunità adattativa. Il legame di CD40 attiva la segnalazione NF-κB canonica e non canonica, le cascate MAPK e programmi dipendenti da PI3K che promuovono la sopravvivenza cellulare, la produzione di citochine, la presentazione dell’antigene e la ricombinazione di cambio di classe (class-switch) nelle cellule B. La segnalazione CD40–CD40L è centrale per la formazione del centro germinativo e per le risposte umorali T-dipendenti, e la sua disregolazione è stata collegata a immunodeficienza, infiammazione cronica e alla biologia delle neoplasie delle cellule B. In quanto recettore immunoregolatorio nodale, CD40 è frequentemente studiato nei percorsi che controllano la maturazione delle APC, il priming dei linfociti T e le reti trascrizionali infiammatorie.
CD40 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD40 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD40. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD40. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD40 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.