Plasmide Double Nickase (h) CD40: sc-400524-NIC

CD40 code un membre de la superfamille des récepteurs du TNF exprimé sur les cellules présentatrices d'antigène, notamment les lymphocytes B, les cellules dendritiques et les macrophages, où il intègre des signaux de costimulation qui façonnent l'immunité adaptative. La liaison de CD40 active les voies NF-κB canonique et non canonique, des cascades MAPK, ainsi que des programmes dépendants de PI3K qui favorisent la survie cellulaire, la production de cytokines, la présentation d'antigènes et la recombinaison de commutation de classe des lymphocytes B. La signalisation CD40–CD40L est au cœur de la formation des centres germinatifs et des réponses humorales dépendantes des cellules T, et sa dérégulation a été associée à l'immunodéficience, à l'inflammation chronique et à la biologie des malignités des lymphocytes B. En tant que récepteur immunorégulateur nodal, CD40 est fréquemment étudié dans les voies qui contrôlent la maturation des CPA, l'amorçage des cellules T et les réseaux transcriptionnels inflammatoires.

CD40 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD40 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD40. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD40. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD40.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.