Plasmide Double Nickase (h) CD34: sc-400197-NIC

CD34 est une glycoprotéine transmembranaire de type sialomucine, largement utilisée comme marqueur des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques humaines, et également exprimée par l'endothélium vasculaire ainsi que par certaines populations stromales. Elle contribue à l'adhésion et au trafic cellulaires en modulant les interactions avec les sélectines et les composants de la matrice extracellulaire, influençant la migration, le homing et la rétention au sein de la niche. Par ses effets sur l'organisation membranaire et la signalisation à la surface cellulaire, CD34 est associée à des processus qui gouvernent le développement hématopoïétique, la biologie endothéliale et le recrutement des cellules inflammatoires. Des profils d'expression altérés de CD34 présentent un intérêt pour l'étude des hémopathies malignes, du remodelage vasculaire et de la dynamique des cellules souches dans des modèles de maladie.

CD34 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD34 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD34. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD34. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD34.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.