CD27 Plasmide Double Nickase (h): sc-401938-NIC

CD27 è una molecola costimolatoria della superfamiglia dei recettori del TNF, espressa sui linfociti T attivati, sui linfociti B della memoria e su alcuni sottogruppi di cellule NK, in cui il legame con CD70 amplifica l’attivazione guidata dall’antigene. La segnalazione di CD27 promuove la sopravvivenza, la proliferazione e la differenziazione dei linfociti attraverso vie mediate da TRAF che convergono sulle cascate di NF-κB e MAPK, modulando la produzione di citochine e la memoria immunitaria adattativa. Un’attività CD27–CD70 deregolata è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria, infiammazione cronica e interazioni tra tumore e sistema immunitario, e difetti ereditari di CD27 possono compromettere l’immunità antivirale e le risposte umorali. In quanto recettore di superficie con una biologia del ligando ben definita, CD27 è spesso oggetto di studio nei meccanismi di attivazione immunitaria, esaurimento e decisioni di destino di linea dei linfociti.

CD27 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD27 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD27. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD27. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD27 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.